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1、农杆菌转化法:农杆菌是土壤中的一种微生物,在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物,对大多数单子叶植物没有感染能力。
2、主要方法:【1】导入植物受体细胞:(1)农杆菌转化法。
3、把重组载体DNA分子引入受体细胞的方法很多,如常用的重组质粒大肠杆菌热激转化法、病毒DNA感染法、生物介导法等。
1、将目的基因导入植物细胞***用最多的方法是农杆菌转化法,此外,还有基因枪法和花粉管通道法(抗虫棉)。
2、所需要的酶是:切割质粒的限制性内切酶、将二者连接完整的连接酶。通过基因工程手段,用特定的限制性内切酶,切割目的基因和质粒载体。
3、两种形式:纵向转移和横向转移。纵向转移是指通过亲代-子代这样的遗传的方式,将遗传信息从一个个体传递到另一个个体。
4、物理方法 1 DNA直接注射法: 是目的基因导入的最简单方法, 但注入量有限, 能够接触到的肿瘤细胞有限,故获得的肿瘤细胞转化率很低, 多通过肿瘤局部多点注射给药。
1、可通过转染的方法将目的基因导入受体细胞;包括化学转染法:deae-葡聚糖法,磷酸钙法,人工脂质体和物理方法:①显微注射②电穿孔③基因枪等;此外还可通过辅助载体(如病毒)将目的基因导入到宿主细胞。
2、脂质体载体、受体介导法。3 生物学方法 主要通过构建病毒载体来完成。如逆转录病毒、腺病毒、单纯疱疹病毒、腺相关病毒、痘苗病毒、杆状病毒。
3、从基因文库中获取目的基因;cDNA文库;反转录法;人工合成法。目的基因,也称靶标基因,是指在实验中研究或操纵的特定基因。
1、DNA分子杂交技术:用同位素标记的目的基因片段作探针,与受体染色体DNA进行杂交。近年来研究者常***用PCR-Southern杂交技术,即先对被检测的材料进行PCR扩增,然后再用目的基因的同源探针与扩增产物进行杂交。
2、常用方法:基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌,枯草杆菌,土壤农杆菌,酵母菌和动植物细胞等。
3、先加到载体上:质粒、动植物病毒等 再导入受体细胞:显微注射、病毒侵染等方法 目的基因导入受体,需要运输工具即运载体,如大肠杆菌的质粒。
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